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技術(shù)文章
2019-122
本文以RFectPlasmidDNATransfectionReagent（RFect質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒），作為攜帶質(zhì)粒穿膜的載體物質(zhì)，具體介紹DNA轉(zhuǎn)染方法。圖.用本產(chǎn)品4ul轉(zhuǎn)染1ugpEGFP-C2質(zhì)粒到293T細(xì)胞后，綠色熒光蛋白的表達(dá)情況。貼壁/懸浮細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染-RFect質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染方法步驟:一、貼壁/懸浮細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染操作流程（以24孔板轉(zhuǎn)染為例）A.細(xì)胞接種:1.轉(zhuǎn)染前24小時(shí)左右對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)接，接種密度約為每孔0.3~1×105個(gè)細(xì)胞；2.過夜培養(yǎng)。B.R...
查看更多2019-1123
1、盡可能地減少血清凍融次數(shù)。2、培養(yǎng)基無需37℃水浴。3、培養(yǎng)基保持PH值7.0-7.2。4、嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。5、掌握細(xì)胞傳代的時(shí)機(jī)，細(xì)胞切勿生長過老。6、一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁。7、然后，在鏡下觀察細(xì)胞培養(yǎng)生長的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。8、如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。9、如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況...
查看更多2019-1122
實(shí)驗(yàn)原理脂質(zhì)體(LR)試劑是陽離子脂質(zhì)體DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前條件下方面的轉(zhuǎn)染方法之一。轉(zhuǎn)染率高，優(yōu)于磷酸鈣法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA轉(zhuǎn)染到各種細(xì)胞。用LR進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，首先需要優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，應(yīng)找出該批LR對(duì)轉(zhuǎn)染某一特定細(xì)胞適合的用量、作用時(shí)間等，對(duì)每批LR都要做。先要固定一個(gè)DNA的量和DNA/LR混合物與細(xì)胞相互作用的時(shí)間，DNA可從1-5ug和孵育時(shí)間6h，開始，按這兩個(gè)參數(shù)繪出相應(yīng)LR需...
查看更多2019-1121
實(shí)驗(yàn)材料0.4%w/vtrypanblue(GibcoBRL15250-061)Erythosinbluishstain取0.1gramErythrosinbluish(SigmaE-9259)及0.05grampreservativemethylparaben(SigmaH-3647)溶于100mlCa/Mgfreesaline血球計(jì)數(shù)盤及蓋玻片(Hemocytometerａndcoverslip)計(jì)數(shù)器(counter)低倍倒立顯微鏡粒子計(jì)數(shù)器(Coultercounte...
查看更多2019-1120
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)和掌握外源基因?qū)胝婧思?xì)胞的主要方法——脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染。了解外源基因進(jìn)入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達(dá)（綠色熒光蛋白），為染色準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料。二、實(shí)驗(yàn)原理上圖所示是脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染的示意圖，它顯示了外源質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞的一般過程。外源基因進(jìn)入細(xì)胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導(dǎo)法和病毒介導(dǎo)法。電擊法是在細(xì)胞上短時(shí)間暫時(shí)性的穿孔讓外源質(zhì)粒進(jìn)入；磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進(jìn)入細(xì)胞；病毒法是利用包裝...
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