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小鼠巨噬細胞Ana-1使用說明書

發(fā)布日期: 2020-06-23
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小鼠巨噬細胞;Ana-1使用說明書


品名稱 :小鼠巨噬細胞;Ana-1
生長特性 : 貼壁生長

形態(tài)特性

生長特性 懸浮生長

特征特性

培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 胎牛血清,10%

傳代方法 1:2。3天內(nèi)可長滿。

傳代情況 PN

凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測 陰性

STR

同工酶

染色體應(yīng)用:
1、細胞因子檢查試劑盒,如白介素、腫瘤壞死因子、干擾素、轉(zhuǎn)化生長因子、凋亡因子等等;  2、心肌梗塞檢查ELISA試劑盒,如肌鈣蛋白、肌紅蛋白、C-反響蛋白等等;
3、內(nèi)分泌檢查ELISA試劑盒,如甲狀腺、胰腺、性激素、孕酮、睪酮、生長激素、生長抑素、催乳素、促腎上腺皮質(zhì)激素等等;
4、肝纖維化檢查ELISA試劑盒,如纖維連接蛋白、膠原、基質(zhì)金屬蛋白酶,層粘蛋白等等;
5、本身免疫檢查,如甲狀腺、抗核抗體、DNA、抗胰島細胞抗體、蛋白酶、角蛋白抗體、
核糖體蛋白抗體、抗聚角蛋白微絲蛋白抗體、抗平滑肌抗體等等。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時,應(yīng)將細胞收集,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,吹打均勻后,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進行凍存。
培養(yǎng)操作步驟 
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時; 
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

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