通用細胞凍存液操作步驟以及注意事項

       隨著實驗室細胞培養(yǎng)的發(fā)展，除了原代培養(yǎng)之外，人工開發(fā)出來的細胞系的保存越來越重要。冷凍保存細胞系的優(yōu)點如下：1、減少基因漂移；2、減緩細胞系的衰老；3、穩(wěn)定表型；4、減少微生物污染及交叉污染機會等。細胞冷凍的原理在于盡可能降低細胞內(nèi)的晶體形成，減少細胞內(nèi)水凝固所形成的高濃度溶質(zhì)對細胞造成的低溫損傷，從提高細胞復(fù)蘇時的存活率。細胞凍存的數(shù)量應(yīng)保證復(fù)蘇時低溫保護劑獲稀釋，稀釋后的細胞濃度扔高于正常傳代的細胞濃度為宜，這是因為當(dāng)?shù)蜏乇Ｗo劑稀釋以后，該濃度一般不會對細胞造成毒性損傷。

     Leagene 通用細胞凍存液主要由FBS、DMSO等組成，是非常經(jīng)典的一種無菌凍存液。用于各種哺乳動物原代細胞、傳代細胞系、雜交瘤細胞等的凍存。

自備材料：

1、 細胞計數(shù)器 2、 細胞凍存管 3、 超低溫冰箱或液氮 4、 超凈工作臺

操作步驟:

1、培養(yǎng)細胞至對數(shù)生長晚起，顯微鏡觀察其外觀、形態(tài)、有無污染等，取狀態(tài)良好的細胞進行凍存操作。如為貼壁生長細胞，用胰蛋白酶消化并用*培養(yǎng)基終止消化，進行細胞計數(shù)；如為懸浮生長細胞，進行細胞計數(shù)。

2、離心，棄上清

3、加入適量的通用細胞凍存液，重懸細胞，使細胞濃度達到、ml，置于凍存管中，密封，不要擰的太緊，避免彎曲變形。

4、一般進行凍存。亦可采用-20℃30min，-70℃過夜，后置于液氮罐中長期存儲。

注意事項：

1、注意在超凈工作臺內(nèi)無菌操作，盡量避免污染。

2、初次使用融化后可在4℃保存1個月，單應(yīng)減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效。

3、雜交瘤細胞凍存時應(yīng)定期復(fù)蘇，檢查細胞的活性和分泌抗體的穩(wěn)定性。

4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作